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专用破菌液在大肠杆菌菌种和蛋白表达高通量筛选中的应用
发布时间:2024/3/29 14:23:04   点击次数:350次

 

大肠杆菌表达系统是使用很广泛的蛋白质表达系统,拥有遗传背景清楚、表达水平高、操作简单、培养周期短等优点,市售的大约30%的重组蛋白产品都是由大肠杆菌系统生产而来。


应用大肠杆菌表达系统时,为了得到符合科研和产业需求的重组蛋白目标产物,往往需要进行目标蛋白基因或菌种的突变,进行大量且繁琐的表达菌种和高表达蛋白突变体的筛选工作。大肠杆菌作为宿主菌,表达的蛋白定位为胞内、胞外和周质腔三种。为获得胞内蛋白或周质腔蛋白,往往需要对大肠杆菌进行破碎。虽然胞外蛋白可以借助信号肽的引导分泌到胞外,但蛋白的分泌效率通常不高,且很多时候,发酵中后期目标蛋白才开始运输到胞外,导致绝大多数蛋白仍储存在胞内,所以在进行蛋白制备时,为提高蛋白收率,仍需要进行细胞破碎。因此,破碎细胞是高通量筛选大肠杆菌菌种时必不可少的环节。


目前常用的破碎细胞的方法有超声、均质机压力、溶菌酶、反复冷冻、化学试剂等,但是这些方法不同程度存在破碎效率低、成本高、周期长、细胞破碎不均一等的缺点。威尼斯欢乐娱人城3788.v开发的大肠杆菌专用破菌液,能够高效、简便的对大肠杆菌进行细胞破碎,特别适用于需要细胞破碎的高通量筛选。

 

 

★ 产品优势


1. 原位破菌,使用便捷,筛选成本更低
原位收集菌体,原位破菌,高通量操作。适用于各种型号培养板(如96孔板、48孔板、6孔板等),节省仪器成本、人力成本,节约时间,方便操作。

 

2. 组成成分温和
不含还原剂、强变性剂、离子型去污剂等烈性成分,对绝大多数蛋白结构和活性无影响。

 

★ 使用方法


1. 按常规方法,在培养板(如96孔板、48孔板、24孔板等)中接种培养大肠杆菌,至蛋白表达完成,即可使用孔板离心机离心收菌,弃去上清,尽量去除干净;


2. 只需将孔板中收集的菌体按照孔板体积的五分之一左右加入破菌液,简单混匀,置于-20°C以下冰箱,待完全冷冻结实。需要破菌时取出室温自然解冻充分,然后按常规方法高速冷冻离心,收取破菌上清和菌体沉淀。


 

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