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超级核酸酶(全能核酸酶)使用指南
发布时间:2021/12/16 14:34:05   点击次数:2532次

 

一、产品简介

 

超级核酸酶CRGase是一种来源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens,也称灵杆菌)的非特异性核酸内切酶,也称全能核酸酶或广谱核酸酶。该核酸酶可在非常宽泛的条件下降解单链、双链、线状、环状、天然或变性等各种形式的DNA或RNA,产生长度为3至5个碱基的5'-单磷酸寡核苷酸。

 

本产品用途广泛,可用于在重组蛋白、病毒疫苗、抗体药物等生物制品生产过程中去除核酸,或用于降低细胞、组织、微生物等蛋白裂解液样品的粘度等(可以用于化学破菌而省去超声仪或高压均质机,或者结合化学破菌大幅度减少超声仪或高压均质机的工作负荷)。

 

本产品采用我公司自主研发的技术平台表达、纯化和制备,分子量约为52.3kDa。本产品活性部分与Serratia marcescens中的天然核酸内切酶氨基酸序列完全一致。

 

二、产品性质

来源

E. coli

分子量

52.3 kDa

纯度

不小于 95% SDS-PAGE

等电点

6.19

酶活

不小于 200 U/μL

最适酶活 pH

8.0-9.2 (工作范围 pH 6.0-10.0

最适酶活温度

37℃ (工作范围 0℃-42℃

最适辅助因子

2mM Mg2+ (工作范围 1-10 mM

蛋白酶活性残留

未检出

保存缓冲液

10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油

活性单位定义

37℃ pH 8.0 反应条件下,在 30 min 内完全消化 37 μg DNA 成为寡核苷酸的酶量(相当于使 △A260 吸收值变化 1.0 )定义为一个活性单( U )。

 

三、产品用途

 

1)有效去除各种重组蛋白制备过程中的核酸残留;
2)有效去除病毒疫苗和各种重组病毒中的核酸,以符合国家食药监局相关指南中关于核酸污染的要求;
3)有效降低细胞裂解液由于大量核酸存在而导致的粘度过大,以使裂解液易于后续操作;
4)有效降低大肠杆菌或其它工程菌裂解液粘度,大幅改善蛋白制备过程中菌体裂解液难过滤、难离心的问题,节约设备和人力成本;
5)在某些情况下,充分去除核酸可以提高包涵体蛋白的复性率;
6)在实时定量PCR测定重组病毒滴度时,用于去除病毒包装细胞的核酸和包装质粒污染;
7)有效防止细胞成团,在细胞培养液中或某些细胞冻存液中加入适量超级核酸酶,可以防止细胞成团,以利于后续细胞分析和检测。超级核酸酶没有蛋白酶的活性残留,本身也不会对健康细胞造成伤害,因此是防止细胞成团的理想选择。
8)在二维凝胶电泳(2-DE)的过程中,加入核酸酶可以提高蛋白质的分离效率和双向电泳的分辨率。


 

四、产品效果



 

五、运输和保存方法

 

低温运输(冰袋或干冰),-20℃保存,有效期3年。4℃保存一个月,酶活性没有明显变化。

   
六、常见化学试剂兼容条件

化学试剂

最佳条件

有效条件

DTT

0-100 mM

可以大于 100 mM

2-Mercaptoethanol

0-100mM

可以大于 100mM

Triton X-100

--

小于 0.4%

Urea

--

小于 5M

SDS

--

小于 0.05%

磷酸根离子

0-10 mM

0-100 mM

单价阳离子(如 Na + , K+ , NH4 +

0-20 mM

0-150 mM

(NH4)2SO4

--

小于 100mM

 

七、使用方法示例(去除细胞裂解上清中的核酸)

 

 1、样本准备
大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS或其它缓冲液清洗1次,8,000 rpm离心5 min,收集菌体沉淀。
贴壁细胞:去除培养基,用PBS清洗细胞,去除上清。
悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm离心10 min,收集细胞沉淀。

2、样品处理
   将收集到的菌体或细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1:(10~20) 的比例进行裂解处理,可以在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞。

3、酶的添加
按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加超级核酸酶,也可以先进行预实验自行选择添加的酶量,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

4、上清获取
以12,000 rpm的转速高速离心10-30min,去除沉淀,即获得菌体或细胞裂解液上清,再进行后续相关实验。

 

八、注意事项
 

1)若溶液为高盐溶液,偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。尽量按照上表“常见化学试剂兼容条件”表中的浓度范围调整待处理样品相关试剂的浓度,以使酶活性处于最大。
2)不建议-80ºC保存本产品,也不建议反复冻融,有可能会降低产品的酶活性,可以适当分装保存于-20ºC。

 

 

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